磺胺類(lèi)藥物是一種具有對(duì)氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)的抗生素，具有廣譜抗菌效果，廣泛應(yīng)用于畜牧生產(chǎn)行業(yè)。過(guò)度使用磺胺類(lèi)藥物飼養(yǎng)會(huì)通過(guò)動(dòng)物食可用組織積累在人體內(nèi)，有嚴(yán)重副作用和致癌性，對(duì)人體健康造成損害。我國(guó)規(guī)定所有使用動(dòng)物的肌肉、脂肪肝、腎臟食品中磺胺類(lèi)藥物的最大殘留量為0.1 mg/kg。因此對(duì)于可食用動(dòng)物組織中的磺胺類(lèi)藥物殘留的檢測(cè)技術(shù)極其重要。

　　磺胺類(lèi)藥物檢測(cè)方法主要有液相色譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、酶聯(lián)免疫發(fā)等。其中2014年農(nóng)質(zhì)發(fā)發(fā)布的檢測(cè)方法中以高效液相色譜法為檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，目前許多檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)發(fā)了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行樣品中磺胺類(lèi)藥物的殘留，提高了檢測(cè)方法分辨率和檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。目前以官方權(quán)威的高效液相色譜法為例，對(duì)完整實(shí)驗(yàn)過(guò)程和所需試劑和儀器設(shè)備進(jìn)行介紹，液相色譜-質(zhì)譜儀聯(lián)用方法也會(huì)在文末補(bǔ)充質(zhì)譜儀設(shè)置參數(shù)。

磺胺類(lèi)藥物殘留檢測(cè)方法

圖1 可食用動(dòng)物組織磺胺類(lèi)藥物殘留檢測(cè)實(shí)驗(yàn)流程

　　1.試劑配置

　　配置95%、80%乙腈溶液(含0.2%甲酸)，配置標(biāo)準(zhǔn)液儲(chǔ)備液1mg/mL，梯度稀釋配置樣品工作液，配置完成后保存。

　　2.樣品前處理取檢測(cè)樣品和對(duì)照樣品利用高速分散器(高速勻漿機(jī))對(duì)樣品進(jìn)行均質(zhì)分散，利用超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步破碎，完全釋放出細(xì)胞內(nèi)含物。

　　我們新芝為客戶(hù)提供兩種能夠進(jìn)行組織分散儀器，S10手提式高速勻漿機(jī)以及XHF-DY高速分散器分別能夠故處理小體積(1-120mL)和大體積(3-1000mL)處理量，供需選擇。同時(shí)提供超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)SCIENTZ-IID進(jìn)行(0.5-600mL樣品量)細(xì)胞的破碎處理。

　　下圖是具體性能和參數(shù)：

圖2S10手提式高速勻漿機(jī)性能圖

圖3XHF-DY高速分散器性能圖

圖4超聲細(xì)胞破碎儀性能

　　3.標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制分別準(zhǔn)確量取磺胺類(lèi)藥物標(biāo)準(zhǔn)品工作液，用梯度稀釋成濃度為0.05、0.1、0.5、1.0、5.0μg/mL(流動(dòng)相稀釋)系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液并進(jìn)行測(cè)量，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

　　4.提取稱(chēng)取試料5(±0.05)g于50 mL離心管中，加入無(wú)水硫酸鈉4 g，乙腈15 mL，以10000r/min以上的速度均質(zhì)60 s后，以5000 r/min速度離心5 min，將上層溶液轉(zhuǎn)移到另一離心管中，下層殘?jiān)右译?5 mL，渦旋混勻1 min，5000 r/min速度離心5 min，合并兩次的上清液于同一離心管中，加正己烷10 mL，振蕩5 min，靜置或離心分層后，取下層液體，加入正丙醇5 mL，50℃氮吹干，加95%乙腈溶液3 mL，渦旋混合1 min，超聲萃取2 min，作為備用液。

　　新芝能夠?yàn)榭蛻?hù)提供高速冷凍離心機(jī)HSC-2015L和HSC-3020L兩款，其中HSC3020L是前一款的升級(jí)款。提供DT系列的超聲波清洗機(jī)，助力超聲萃取，提高檢測(cè)準(zhǔn)確度。同時(shí)可應(yīng)用于超濾和液相檢測(cè)前脫氣功能：

圖5高速冷凍離心機(jī)性能圖

圖6超聲清洗機(jī)性能圖

　　5.樣品凈化取95%乙腈溶液3mL活化堿性氧化鋁小柱，將上述備用液全部過(guò)柱。用95%乙腈溶液5mL滌雞心瓶后過(guò)柱，不收集，擠干或負(fù)壓抽干柱子里的液體，用80%乙腈溶液10mL洗脫，收集洗脫液，加入正丙醇5 mL后，50℃氮吹干，準(zhǔn)確加入流動(dòng)相溶解2.0mL，渦旋混合1 min，超聲2 min，過(guò)0.22μm濾膜后，取濾液上機(jī)分析。

　　6.測(cè)定高效液相色譜參考條件色譜柱： C18，250mm×4.6mm(i.d.)，粒徑5μm，或相當(dāng)者;流動(dòng)相：乙腈-甲醇-水-冰乙酸(2+2+9+0.2);流速：1mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm;進(jìn)樣量：20μL;柱溫：30 ℃質(zhì)譜儀參考條件(AB SCIEX API 4000+質(zhì)譜聯(lián)用儀)電噴霧離子源(ESI)：正離子電離模式;去溶劑溫度：550 °C;氣簾氣壓力：172 kPa;碰撞氣壓力：41 kPa;離子氣1壓力：414 kPa;離子氣2壓力：379 kPa;噴霧電壓：5500 V;掃描方式：依賴(lài)保留時(shí)間的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(scheduled MRM)